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從緩衝液的角度來看,他們對你的蛋白應該沒有什麽影響。不同的是2種緩衝液的緩衝能力和pH範圍不一樣,由各自的pKa決定的。HEPESpKa在7.55,使用範圍pH6.5-8.5。Tris為弱堿,在室溫(25℃)下,它的pKa為8.1;根據緩衝理論,Tris緩衝液的有效緩衝
範圍在pH7.0到9.2之間。需要注意的是溫度對Trisbuffer的pH影響很大,
Tris緩衝液(如10mMpH8.3@25℃)Ph對溫度敏感(25℃與72℃差異較大),HEPES的PH對溫度基本無變化
一個是離子緩衝體係,一種是非離子緩衝體係
稱取一定質量的HEPES(根據你需要的濃度計算),溶於蒸餾水中,然後用濃的NaOH溶液(如1M)調至所需pH值。
HEPES是一種非離子兩性緩衝液,其在pH7.2-7.4範圍內具有較好的緩衝能力。
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